자가포식소가 리소좀과 융합하여 자가용해소가 되면, pH에 민감한 적색 형광 단백질은 형광 강도가 감소하지만, pH에 안정적인 청색 형광 단백질은 그렇지 않습니다. 따라서 생세포에서 RB-LC3의 적색/청색(R/B) 강도 비율을 측정함으로써 자가포식의 실시간 진행을 모니터링할 수 있습니다. 26 , 27 자가포식 소포의 pH 값을 추정하기 위해, 우리는 다양한 pH 조건에서 측정된 R/B 강도 비율을 그래프로 나타내어 pH와 RB-LC3의 R/B 강도 비율 사이의 상관 관계식을 설정했습니다( 그림 S1 B). 우리는 자가포식 소포의 R/B 비율이 크기와 무관함을 확인했습니다( 그림 S1 C).
RB-LC3 센서와 BiFC 기반 HTT-polyQ 응집 시스템을 이용하여 다양한 polyQ 길이를 가진 응집체의 자가포식 과정을 조사했습니다. Q10 및 Q30 VN + VC의 경우, LC3 양성 자가포식 소포의 pH는 형질전환 후 48시간 만에 7.4에서 6.5로 감소했지만, Q43, Q61 및 Q103 VN + VC의 경우에는 감소하지 않았습니다( 그림 1C ). 이는 polyQ 길이가 43을 초과하는 응집체에서는 자가포식이 진행되지 않음을 나타냅니다.
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리소좀과 융합
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